在細胞分選中,陰選通常是指對非目的細胞進行標記和去除,來得到目的細胞。避免通過直接的標記目的細胞(比如使用表面特異性抗體標記),從而來減少細胞活化可能。因此,陰選方法的優(yōu)勢在于可以保持目的細胞未受刺激的原始狀態(tài),分選速度快。不過相對陽選而言純度稍低,而且需要事先對原始樣品的細胞組分有所了解,準備相應(yīng)的標記抗體。
本文將分享一種新的陰選方法和相關(guān)數(shù)據(jù),利用Strep-Tactin?TACS的瓊脂糖層析柱,這種層析柱既可用于細胞陽選,也能用于細胞陰選中。
為了評估Strep-Tactin?TACS瓊脂糖柱細胞陰選的效率,實驗從外周血單個核細胞(PBMC)樣品中富集了CD3- CD56+自然殺傷細胞(NK)。材料為Strep-Tactin?TACS瓊脂糖柱以及生物素化的抗體,僅10分鐘,便完成了細胞陰選 (圖1)。
流程如下
陰選流程:生物素化抗體與PBMC孵育標記非目的細胞,加入至親和層析柱后,即可收集目的細胞
(此處用到的試劑見文末)
結(jié)果與討論
通過使用陰選將非目的細胞去除后,獲得了高純度的目的細胞群。實驗用到了Strep-Tactin?TACS瓊脂糖層析柱,并進行了兩次獨立實驗。結(jié)果如圖2所示。 NK細胞從6%的起始豐度(圖2A)通過富集達到了86%(圖2B)。所有抗體標記的細胞群幾乎均去除,剩余的非NK細胞主要成分為未標記的細胞。數(shù)據(jù)表明, Strep-Tactin?TACS瓊脂糖柱不僅可以在陽選中使用,還可以搭配適當?shù)目贵w標記,有效進行細胞陰選。
圖2:通過陰選富集PBMC中的CD56 + NK細胞。Strep-Tactin?TACS瓊脂糖柱與生物素化抗體結(jié)合,從而實現(xiàn)NK細胞的富集,純度從6%(A)提高到86%(B)(n = 2)
實驗材料
為什么使用Strep-Tactin?TACS?實驗中使用的Strep-Tactin?TACS親和層析柱,主要成分Strep-Tactin?是鏈霉親和素(Streptavidin)的一種突變體,借助鏈霉親和素-生物素作用原理,Strep-Tactin?與生物素(biotin)的親和力介于100 pM – 100 fM間。當向含有的Strep-Tactin?層析柱中加入生物素化的抗體時,便能將其固定在柱子中,特異性捕獲細胞,進行陰選。
抗體的選擇
實驗中可以選擇的抗體有親和力較高的生物素化單克隆抗體(圖3A),或帶有Twin-Strep-tag?的抗體,如圖3B所示。帶Twin-Strep-tag?的單克隆抗體在生產(chǎn)和純化更便捷,還可以通過加入生物素來洗脫已經(jīng)結(jié)合在柱子上的細胞。并且,Twin-Strep-tag?的單克隆抗體的位置相對更固定一些。
使用生物素化抗體好處在于其與Strep-Tactin?的親和力相比之下更高,可以稍提高陰選效率,但是總體來說兩種類型的抗體對細胞陰選都是非常有效的。
圖:單克隆抗體用生物素(A)或Twin-Strep-tag?(B)標記,兩種都可以固定在Strep-Tactin?TACS瓊脂糖層析柱中。
總而言之,作為靈活的細胞研究工具,Strep-Tactin?TACS瓊脂糖層析柱在細胞分選的應(yīng)用不僅限于陽選,還可以在陰選中結(jié)合多種生物素化抗體(或Twin-Strep-tag?標記的抗體)一起使用。整個細胞分選過程只需10分鐘,是一種快速有效的細胞陰選方案。
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