“一個(gè)陽性細(xì)胞,對(duì)應(yīng)一個(gè)ELISPOT斑點(diǎn)”,這是ELISPOT檢測的理論前提。無數(shù)的實(shí)驗(yàn)也證明了這一點(diǎn)?,F(xiàn)有的抗體技術(shù)以及酶聯(lián)放大技術(shù)確實(shí)可以把單個(gè)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的行為記錄下來,ELISPOT板上的每一個(gè)斑點(diǎn)就是好的證明。下面我們來看一看ELISPOT斑點(diǎn)的特征。
圓形,有暈核結(jié)構(gòu)
這是判定真假ELISPOT斑點(diǎn)的主要標(biāo)準(zhǔn)。ELISPOT斑點(diǎn)有
這種結(jié)構(gòu)可以從幾何學(xué)的原理得到很好的理解和解釋(如圖
1.2所示)。懸浮在ELISPOT板膜上的細(xì)胞,它分泌細(xì)胞因子
是沒有方向性的,均勻地向四面八方擴(kuò)散,如果擴(kuò)散到
ELISPOT板膜,就會(huì)被板膜上的包被抗體捕獲。在所有從細(xì)胞到斑膜的路徑中,有條路徑短,這就是位于細(xì)胞正下方到板膜的垂直距離。路徑越短,擴(kuò)散中耗散損失就越少,到達(dá)該點(diǎn)的細(xì)胞因子就越多,將來顯色的時(shí)候顏色就越深。以垂直距離點(diǎn)為圓心,向外畫一系列的同心圓,同心圓的直徑越大,細(xì)胞因子擴(kuò)散的距離就越長,耗散越多,到達(dá)的細(xì)胞因子就越少,顏色就越淺。當(dāng)超過一定距離之后,擴(kuò)散到達(dá)的細(xì)胞因子就減少到背景水平了,這就是斑點(diǎn)的邊界。
大小不均一,正態(tài)分布
ELISPOT斑點(diǎn)要比產(chǎn)生它的那個(gè)細(xì)胞大很多。我們知道,
哺乳動(dòng)物細(xì)胞的直徑約是5-10μm,而ELISPOT斑點(diǎn)的直徑通常是50-150μm,比細(xì)胞大10倍以上。
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